TAクローニング

ただし、PCR酵素の中にはPCR産物の両端にAのオーバーハングを形成しないものもあり、 その場合にはTAクローニングはできません。 また、Taqポリメレイスを利用している場合でも、条件によってはクローニング効率がかなり悪くなる場合があります。

ライゲーションしたプラスミドをエレクトロポレーションする場合には、電流の流れ過ぎを防ぐために、プラスミドDNAを精製する必要があります。

実験手順

• 先週のPCR産物をQIAquick PCR Purification Kitで精製する
• 0.5mlのPCRチューブにTAベクター１マイクロリットル、精製したPCR産物９マイクロリットル、 ライゲーションミックス１０マイクロリットルを加える。この時にはクーラーラックは使用しない。
• サーマルサイクラーを用いて１６度で３０分程度インキュベーションする。
• キアゲンのキットを用いて、プラスミドDNAの精製を行う。

最終更新年月日 2007年5月7日

佐賀大学　農学部　動物生産学分野　和田研究室

ywada@cc.saga-u.ac.jp